Itachi w młodym wieku został okrzyknięty geniuszem. W wieku 7 lat skończył Akademię Ninja, rok później aktywował Sharingana. Chūninem został w wieku 10 lat, a jako nastolatek był już członkiem ANBU. Przewyższał siłą wszystkich pozostałych członków klanu Uchiha, czego dowiódł zabijając ich. Oszczędza jedynie brata, Sasuke, dzięki któremu chciał w przyszłości pozyskać najsilniejszą odmianę Sharingana. Itachi jest głównym obiektem obsesyjnej zemsty, jaka ogarnęła umysł Sasuke od czasu upadku klanu. Pragnienie zabicia brata, świadomie przez niego podsycane, jest podstawowym motorem działań Sasuke. Itachi jest posiadaczem wyższego poziomu Sharingana- Mangekyō Sharingan. Jest to genjutsu, z którego nie można się uwolnić. Aby aktywować kalejdoskop należy zabić najbliższego przyjaciela.

Po opuszczeniu wioski, Itachi dołącza do Akatsuki. Po latach nieobecności wraca razem ze swoim partnerem, Kisame Hoshigaki, do Konohy z misją porwania Naruto Uzumakiego, z powodu zapieczętowanego w nim Lisiego Demona, którego organizacja chce posiąść.
Itachi stosunkowo mało pokazuje swoje uczucia. Charakteryzuje się zimnym, ale skutecznym kalkulowaniem sytuacji w walce. Jest cichy, tajemniczy i chłodny. Posiada mroczną osobowość nie okazującą uczuć zewnętrznie. Wszystkie swoje uczucia i emocje tłumi w głębi serca, nie pozwalając aby były widziane na jego twarzy czy w zachowaniu. Wyjątkami są momenty, kiedy Itachi spogląda zamyślony w niebo.

Podczas walki Itachi przeważnie stosuje taktykę defensywną i rzadko atakuje. Kiedy staje do walki z przeciwnikiem korzystającym z technik genjutsu, używa Sharingana do wykonania Demonicznej Iluzji: Lustra Zamiany Nieba i Ziemi (Magen: Kyōten Chiten), aby skierować genjutsu przeciwko jego użytkownikowi.

Mangekyō Sharingan umożliwia Itachiemu wykonanie najpotężniejszych technik klanu Uchiha. Tsukiyomi, którego używa lewym okiem, więzi przeciwnika w iluzorycznym świecie, gdzie jest poddawany torturom psychicznym przez kilka dni, lecz naprawdę trwa to tyle co mrugnięcie oka. Amaterasu, używane przez prawe oko, tworzy czarny ogień, który jest gorący jak słońce i potrafi przepalić każdą przeszkodę. Susanoo jest zaś wielkim eterycznym wojownikiem w kształcie szkieletu, który chroni użytkownika tej techniki przed każdym atakiem.

Ze standardowych technik ninjutsu, Itachi potrafi tworzyć własne Klony Cienia, które przeprowadzają ataki, podczas gdy on sam unika walki. Można też wydać polecenie Wielkiego Wybuchu Klonów (Bunshin Daibakuha), które są w stanie zabić osoby znajdujące się w zasięgu eksplozji. Jako członek klanu Uchiha jest w stanie wykonać Wielką Kulę Ognia (Katon: Gōkakyū no Jutsu) do złapania przeciwników w pułapkę z ognia oraz Technikę Nieśmiertelnego Ognia Feniksa (Katon: Hōsenka no Jutsu), przy pomocy której wydmuchuje wiele małych kul ognistych. Za pomocą techniki Wodnej Amunicji (Suiton: Suigadan), potrafi otoczyć cel kręgiem miażdżącej wody. Techniki i ruchy Itachiego są bardzo szybkie, podobnie jak Kakashiego w pierwszej części.

W Naruto Shippuden Itachi kontroluje własnego klona, który posiada 30% siły i chakry oryginału. Klon zostaje pokonany, ale przez to członkowie Akatsuki zyskują na czasie i mogli ukończyć wyssanie Shukaku z ciała Gaary i zapieczętowanie go. Po tym, jak Sasuke pokonuje Orochimaru, Itachi zostaje ostrzeżony przez Peina, że jego młodszy brat chce go zabić. Kiedy do Konohy dociera informacja o śmierci Orochimaru, Naruto postanawia wyruszyć z wioski, w celu odnalezienia Sasuke i Itachiego. Podczas poszukiwań Uzumaki natyka się na Itachiego w środku lasu. Ten jednak nie chce walczyć, lecz tylko porozmawiać. Naruto atakuje, niepewny jego prawdziwych intencji. Itachi znika.

Sasuke również odnajduje swojego brata i atakuje go. Po krótkiej walce Itachi mówi mu, aby zjawił się sam w kryjówce klanu Uchiha. Po dotarciu na miejsce rozpoczyna się walka na genjutsu obydwu braci. Młodszy wykorzystuje ten moment i staje z tyłu tronu, na którym siedzi Itachi. Natychmiast wbija mu miecz w plecy, przebijając tron na wylot, a później zmieniając się w węże. Okazuje się, że było to kolejne genjutsu. Podczas rozmowy, Itachi wyjawia prawdę na temat trzeciego posiadacza Mangekyō Sharingan, Madary Uchihy. Był on zarówno mentorem Itachiego, jak i jego wspólnikiem podczas rzezi klanu Uchiha. Sasuke jednak nie dowierza w to co powiedział Itachi na temat Madary, gdyż powinien on dawno już nie żyć jako założyciel klanu Uchiha. Podczas tej rozmowy okazało sie, że ceną za używanie Mangekyō Sharingana jest stopniowa utrata wzroku, a w końcu ślepota. Madara Uchiha odkrywa jeszcze jeden sekret Kalejdoskopu, który nie był zapisany w tajemnej świątyni Uchihów. Później dowiadujemy się, iż Itachi planuje pójść w ślady swojego przodka, by odzyskać pełną sprawność wzroku.Ma zamiar wyjąć z oczodołów brata jego gałki oczne. Prawdopodobnie też Madara pomógł mu w zabiciu samego klanu. Podczas walki Itachi wydłubał lewe oko swojemu bratu, lecz ta "sztuczka" okazuje się kolejnym genjutsu i Sasuke wcale go nie traci - przezwycięża Tsukiyomi starszego brata. Itachi, nie mając innego wyjścia, wykonuje Amaterasu, przez co jego umęczone oko zaczyna krwawić i traci w nim wzrok. Następnie Sasuke kolejną techniką sprawia, iż nad polem walki rozpętuje się burza, po czym kieruje w stronę starszego brata ogromne wyładowanie elektryczne, które zwala go z nóg. Itachi jednakże przeżył ten atak, chroniony przez Susanoo. Sasuke próbuje atakować eterycznego wojownika różnymi jutsu, lecz wszystkie skutecznie blokuje. Chwilę później Itachi zaczyna kaszleć krwią, najprawdopodobniej z powodu wyczerpania walką. Podchodzi chwiejnym krokiem do młodszego brata pukając go w czoło podobnie jak to robił w przeszłości, po czym bezwładnie pada na ziemię martwy. Jak później się okazuje, Itachi tuż przed swoją śmiercią przekazał bratu wszystkie swoje techniki związane z Mangekyou Sharingan po to by go chronić.